Βιταμίνη Α στο αίμα

Τιμές αναφοράς (κανονικές) για τη συγκέντρωση βιταμίνης Α (ρετινόλης) στον ορό του αίματος: σε παιδιά 1-6 ετών - 0,7-1,5 μmol/l, 7-12 ετών - 0,91-1,71 μmol/l, 13-19 ετών - 0,91-2,51 μmol/l· σε ενήλικες - 1,05-2,09 μmol/l.

Η βιταμίνη Α είναι μια λιποδιαλυτή βιταμίνη και υπάρχει σε δύο μορφές: την ίδια τη βιταμίνη Α, ή ρετινόλη (που βρίσκεται μόνο σε ζωικά προϊόντα), και την προβιταμίνη Α, γνωστή ως καροτίνη (που λαμβάνεται από ζωικά και φυτικά προϊόντα), η οποία μπορεί να μετατραπεί σε ρετινόλη στα τοιχώματα του πεπτικού σωλήνα. Περίπου το 50-90% της διαιτητικής ρετινόλης απορροφάται στο λεπτό έντερο και μεταφέρεται σε ένα σύμπλοκο συνδεδεμένο με χυλομικρό στο ήπαρ, όπου αποθηκεύεται ως παλμιτική ρετινόλη. Όταν χρειάζεται, απελευθερώνεται στην κυκλοφορία του αίματος ως ρετινόλη σε σύμπλοκο με πρωτεΐνη που συνδέεται με τη βιταμίνη Α. Στον ορό του αίματος, το σύμπλοκο πρωτεΐνης που συνδέεται με τη βιταμίνη Α + ρετινόλης συνδέεται με την τρανσθυρετίνη. Από τον ορό του αίματος, η ρετινόλη προσλαμβάνεται από τα κύτταρα-στόχους, όπως οι φωτοϋποδοχείς του αμφιβληστροειδούς και το επιθήλιο.

Όταν ο οργανισμός λαμβάνει βιταμίνη Α σε ποσότητες που υπερβαίνουν τις ανάγκες του (180-430 mcg ρετινόλης την ημέρα ανάλογα με την ηλικία, το φύλο και τη φυσιολογική κατάσταση), η περίσσεια της εναποτίθεται στο ήπαρ, σχηματίζοντας μια αποθήκη αυτής της βιταμίνης. Όταν η πρόσληψη ρετινόλης με την τροφή μειώνεται, τα αποθέματά της από το ήπαρ απελευθερώνονται στην κυκλοφορία του αίματος, διατηρώντας τη συγκέντρωση ρετινόλης στον ορό του αίματος σε φυσιολογικό επίπεδο (πάνω από 0,7 μmol/l). Άλλες βιολογικά ενεργές μορφές βιταμίνης Α (ρετινόλη και ρετινοϊκό οξύ) υπάρχουν στο αίμα σε πολύ χαμηλές συγκεντρώσεις (κάτω από 0,35 μmol/l). Οι εστέρες ρετινόλης αντιπροσωπεύουν περίπου το 5% της συνολικής βιταμίνης Α (0,1-0,17 μmol/l).

Η βιταμίνη Α παίζει σημαντικό ρόλο στις διαδικασίες οξείδωσης-αναγωγής. Η ρετινόλη προάγει τον σχηματισμό γλυκογόνου στο ήπαρ και τους μύες, βοηθά στην αύξηση της περιεκτικότητας σε χοληστερόλη στο αίμα και συμμετέχει στη σύνθεση στεροειδών και σεξουαλικών ορμονών. Είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη και τον σχηματισμό του σκελετικού συστήματος, την επανασύνθεση ροδοψίνης και επίσης προάγει την κανονική λειτουργία των βλεννογόνων μεμβρανών και του περιβληματικού επιθηλίου του δέρματος, αποτρέποντας τη μεταπλασία, την υπερκεράτωση και την υπερβολική απολέπιση. Η βιταμίνη Α βοηθά στην ενδυνάμωση των μαλλιών, των δοντιών και των ούλων. Τα τελευταία χρόνια, έχει αποδειχθεί ο ποικίλος ρόλος της βιταμίνης Α στην πρόληψη του καρκίνου και στη ρύθμιση της ανοσίας (είναι απαραίτητη για την ολοκλήρωση της φαγοκυττάρωσης, αυξάνει τη σύνθεση Ig, διεγείρει τον σχηματισμό Τ-δολοφόνων, διεγείρει τα Τ-βοηθητικά τύπου II, κ.λπ.). Η βιταμίνη Α είναι ένα ενεργό αντιοξειδωτικό, που δρα κυρίως παρουσία βιταμίνης Ε. προστατεύει τη βιταμίνη C από την οξείδωση. Η ανεπάρκεια βιταμίνης Α θεωρείται παράγοντας κινδύνου για κακοήθη νεοπλάσματα. Πειραματικές μελέτες έχουν δείξει ότι η αύξηση της περιεκτικότητας σε βιταμίνη Α στη διατροφή αυξάνει το μέσο προσδόκιμο ζωής κατά 17,5%. Ο ψευδάργυρος είναι ένας απαραίτητος συμπαράγοντας στον μεταβολισμό της βιταμίνης Α (απαραίτητος για τη σύνθεση της πρωτεΐνης που συνδέεται με τη βιταμίνη Α).

Η μέση ημερήσια ανάγκη για ρετινόλη για ενήλικες (20-50 ετών) είναι 1,2 mg (4000 IU, 1 IU ισοδυναμεί με 0,3 mcg ρετινόλης), για έγκυες γυναίκες - 1,5 mg (5000 IU), για θηλάζουσες γυναίκες - 1,8 mg (6000 IU), για άτομα άνω των 60 ετών - 2,5 mg (10.000 IU). Τουλάχιστον το ένα τρίτο της ημερήσιας ανάγκης για ρετινόλη πρέπει να παρέχεται στον οργανισμό σε τελική μορφή. το υπόλοιπο μπορεί να καλυφθεί με την κατανάλωση καροτενοειδών, από τα οποία σχηματίζεται ρετινόλη στον οργανισμό. Πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι περίπου το 30% της ρετινόλης στα τρόφιμα καταστρέφεται κατά τη θερμική επεξεργασία. Η δραστικότητα της ρετινόλης είναι 2 φορές υψηλότερη από αυτή της καροτίνης, επιπλέον, μόνο το 30-40% της τελευταίας απορροφάται στο έντερο. Επομένως, κατά την αξιολόγηση της διατροφής, πιστεύεται ότι 1 mg ρετινόλης ισοδυναμεί περίπου με 6 mg καροτενοειδών.

Προσδιορισμός ρετινόλης (βιταμίνης Α) και καροτενοειδών στον ορό του αίματος σύμφωνα με την Bessey όπως τροποποιήθηκε από την LA Anisimova

Αρχή της μεθόδου

Ο προσδιορισμός της βιταμίνης Α και των καροτενοειδών βασίζεται στην υδρόλυσή τους σε αλκαλικό διάλυμα αλκοόλης, ακολουθούμενη από εκχύλιση με μείγμα οργανικών διαλυτών.

Αντιδραστήρια

• Διάλυμα υδροξειδίου του καλίου (KOH) 11 M.
• 96% αιθυλική αλκοόλη.
• Διάλυμα υδροξειδίου του καλίου (KOH) 1 M σε αιθυλική αλκοόλη 96%: 1 όγκος διαλύματος KOH 11 M αναμειγνύεται με 10 όγκους αιθυλικής αλκοόλης 96%. Το αντιδραστήριο παρασκευάζεται την ημέρα της μελέτης. Εάν παρουσιαστεί χρωματισμός κατά την ανάμειξη, η αλκοόλη θα πρέπει να καθαριστεί με απόσταξη πριν από τη χρήση.
• Ξυλένιο, χημικά καθαρό
• Οκτάνιο, χημικά καθαρό
• Μείγμα ξυλενίου-οκτανίου: παρασκευάζεται με ανάμειξη ίσων όγκων ξυλενίου και οκτανίου.

Οι μελέτες διεξάγονται χρησιμοποιώντας φασματοφωτόμετρο.

Η διαδικασία προσδιορισμού της βιταμίνης Α

Αίμα που λαμβάνεται από το δάχτυλο (περίπου 1 ml) τοποθετείται σε φυγοκεντρικό σωλήνα και τοποθετείται σε γυάλινο κύπελλο με ζεστό νερό (θερμοκρασία 40-45° C) για 20-30 λεπτά. Για να διαχωριστεί ο ορός, ο θρόμβος αίματος τραβιέται προσεκτικά γύρω από την άκρη των τοιχωμάτων του σωλήνα με μια λεπτή γυάλινη ράβδο και φυγοκεντρείται στις 3000 στροφές/λεπτό για 10 λεπτά.

Συλλέγονται 0,12 ml ορού και μεταφέρονται σε σωλήνα συγκόλλησης, όπου προστίθενται στη συνέχεια 0,12 ml διαλύματος αλκοόλης υδροξειδίου του καλίου 1 M. Το περιεχόμενο ανακινείται καλά.

Δοκιμαστικοί σωλήνες με δείγματα τοποθετούνται σε υδατόλουτρο για 20 λεπτά σε θερμοκρασία 60°C για να πραγματοποιηθεί υδρόλυση.

Τα δείγματα ψύχονται και προστίθενται 0,12 ml μείγματος ξυλενίου-οκτανίου, ανακινούνται έντονα για 10-15 δευτερόλεπτα. Ψύχονται ξανά και φυγοκεντρούνται.

Το ανώτερο στρώμα που περιέχει βιταμίνη Α και καροτενοειδή αφαιρείται προσεκτικά χρησιμοποιώντας μια πιπέτα Pasteur με λαστιχένιο βολβό και μεταφέρεται σε μικροκυβέτες.

Τα δείγματα φασματοφωτομετρούνται σε μήκος κύματος 328 nm για τον προσδιορισμό της βιταμίνης Α και σε μήκος κύματος 460 nm για τον προσδιορισμό των καροτενοειδών.

Μετά τη φασματοφωτομετρία, τα δείγματα εκτίθενται σε υπεριώδη ακτινοβολία για την καταστροφή της βιταμίνης Α. Για το σκοπό αυτό, εγκαθίσταται μια λάμπα χαλαζία (βακτηριοκτόνος) σε απόσταση 15-20 cm από τις μικροκυψελίδες, έτσι ώστε το τμήμα της κυψελίδας που είναι γεμάτο με υγρό να εκτίθεται σε ακτινοβολία. Ο χρόνος ακτινοβόλησης είναι 45-60 λεπτά.

Τα δείγματα επαναφασματοφωτομετρούνται σε μήκος κύματος 328 nm. Η περιεκτικότητα σε βιταμίνη Α προσδιορίζεται από τη διαφορά στις τιμές απόσβεσης (οπτική πυκνότητα) λαμβάνοντας υπόψη τον συντελεστή (παράγοντα) 637 που υπολογίστηκε από τον Bessey για τη βιταμίνη Α.

Ο υπολογισμός πραγματοποιείται σύμφωνα με τον τύπο:

Χ = 637 × (Ε328(1) - Ε328(2)),

Όπου X είναι η περιεκτικότητα σε βιταμίνη Α, μg/dl· 637 είναι ο συντελεστής που υπολογίζεται από τον Bessey για τον προσδιορισμό της βιταμίνης Α· E328(1) είναι η οπτική πυκνότητα του διαλύματος πριν από την ακτινοβόληση· E328(2) είναι η οπτική πυκνότητα του διαλύματος μετά την ακτινοβόληση.

Ο συντελεστής μετατροπής της συγκέντρωσης βιταμίνης Α από µg/dL σε µmol/L είναι 0,035.

Η περιεκτικότητα σε καροτενοειδή υπολογίζεται χρησιμοποιώντας τον τύπο:

Χ = 480-Ε480,

Όπου X είναι η περιεκτικότητα σε καροτενοειδή, μg/dl· 480 είναι ο συντελεστής που υπολογίζεται από τον Bessey για τον προσδιορισμό των καροτενοειδών· E480 είναι η οπτική πυκνότητα του διαλύματος δοκιμής.

Σημείωμα

Σύμφωνα με τον Bessey, κατά τη διεξαγωγή έρευνας μπορεί να χρησιμοποιηθεί μεγαλύτερος ή μικρότερος όγκος ορού, αλλά η αναλογία του προς τον όγκο του διαλύματος αλκοόλης πρέπει να είναι σταθερή με οποιαδήποτε αλλαγή στον όγκο (ποσότητα) του μείγματος ξυλενίου-οκτανίου.

Η φυσιολογική περιεκτικότητα σε βιταμίνη Α στον ορό του αίματος είναι: σε νεογνά και βρέφη - 160-270 μg/l· σε ενήλικες - 1,05-2,45 μmol/l (300-700 μg/l). Η περιεκτικότητα σε καροτενοειδή στον ορό του αίματος των ενηλίκων είναι 800-2300 μg/l.