Ιός της ηπατίτιδας Α

Η ιογενής ηπατίτιδα Α είναι μια μολυσματική ασθένεια των ανθρώπων, που χαρακτηρίζεται κυρίως από ηπατική βλάβη και κλινικά εκδηλώνεται με μέθη και ίκτερο. Ο ιός της ηπατίτιδας Α ανακαλύφθηκε το 1973 από τον S. Feinstone (et al.) χρησιμοποιώντας τη μέθοδο της ανοσοηλεκτρονικής μικροσκοπίας και μολύνοντας πιθήκους - χιμπατζήδες και μαρμοζέτες. Η ουσία της μεθόδου της ανοσοηλεκτρονικής μικροσκοπίας είναι ότι ειδικά αντισώματα (ορός ανάρρωσης) προστίθενται στο διήθημα των κοπράνων ενός ασθενούς με ηπατίτιδα Α και το ίζημα υποβάλλεται σε ηλεκτρονική μικροσκοπία. Λόγω της αλληλεπίδρασης των ιών με συγκεκριμένα αντισώματα, υφίστανται ειδική συσσωμάτωση. Σε αυτή την περίπτωση, είναι ευκολότερο να ανιχνευθούν και η συσσωμάτωση υπό την επίδραση αντισωμάτων επιβεβαιώνει την εξειδίκευση του παθογόνου. Η ανακάλυψη του S. Feinstone επιβεβαιώθηκε σε πειράματα σε εθελοντές.

Ο ιός της ηπατίτιδας Α είναι σφαιρικός, η διάμετρος του ιού είναι 27 nm. Το γονιδίωμα αντιπροσωπεύεται από μονοκλωνικό θετικό RNA με MD 2,6 mm. Δεν υπάρχει υπερκαψίδιο. Ο τύπος συμμετρίας είναι κυβικός - εικοσάεδρο. Το καψίδιο έχει 32 καψομερή, σχηματίζεται από τέσσερα πολυπεπτίδια (VP1-VP4). Σύμφωνα με τις ιδιότητές του, ο ιός της ηπατίτιδας Α ανήκει στο γένος Heparnovirus, την οικογένεια Picornaviridae. Όσον αφορά τα αντιγόνα, ο ιός της ηπατίτιδας Α (HAV - ιός της ηπατίτιδας Α) είναι ομοιογενής. Ο HAV αναπαράγεται καλά στο σώμα των χιμπατζήδων, των μπαμπουίνων, των μπαμπουίνων hamadryas και των πιθήκων marmoset. Για μεγάλο χρονικό διάστημα, ο ιός δεν μπορούσε να καλλιεργηθεί. Μόνο τη δεκαετία του 1980 ήταν δυνατή η απόκτηση κυτταροκαλλιεργειών στις οποίες αναπαράγεται ο HAV. Αρχικά, για τους σκοπούς αυτούς χρησιμοποιήθηκαν συνεχείς κυτταρικές σειρές νεφρού εμβρύου μακάκου ρέζους (καλλιέργεια FRhK-4) και τώρα χρησιμοποιείται μια συνεχής κυτταρική σειρά νεφρικών κυττάρων πράσινου πιθήκου (καλλιέργεια 4647).

Σύμφωνα με τις συστάσεις των εμπειρογνωμόνων του ΠΟΥ, έχει υιοθετηθεί η ακόλουθη ονοματολογία δεικτών του ιού της ηπατίτιδας Α: ιός ηπατίτιδας Α - αντισώματα HAV κατά του ιού της ηπατίτιδας Α: IgM κατά του HAV και IgG κατά του HAV.

Ο HAV είναι ένα μικρό σωματίδιο με διάμετρο 27-30 nm, που έχει εικοσαεδρική συμμετρία και ομοιογένεια. Το ηλεκτρογράφημα που λαμβάνεται χρησιμοποιώντας τη μέθοδο ανοσοσυσσωμάτωσης αποκαλύπτει ηλεκτρονιακά πυκνά σωματίδια με επιφανειακά τοποθετημένα συμμετρικά διατεταγμένα καψομερή. Με αρνητική αντίθεση, αποκαλύπτονται τόσο πλήρη όσο και κενά σωματίδια στα παρασκευάσματα. Το πυρηνοκαψίδιο του HAV, σε αντίθεση με αυτό της γρίπης, δεν έχει επιφανειακές προεξοχές και μεμβράνη. Είναι επίσης σημαντικό το ιικό σωματίδιο του HAV να μην έχει καρδιόσχημη δομή.

Με βάση τις φυσικοχημικές του ιδιότητες, ο ιός της ηπατίτιδας Α ταξινομείται ως μέλος της οικογένειας των πικορναϊών, του γένους εντεροϊών με αύξοντα αριθμό 72. Ωστόσο, αυτή η ταξινόμηση αποδείχθηκε πολύ ασυνήθιστη και ο ΠΟΥ θεώρησε εφικτό να διατηρήσει τον όρο «ιός ηπατίτιδας Α».

Όπως όλοι οι ιοί της οικογένειας Picornaviridae, ο ιός της ηπατίτιδας Α περιέχει ριβονουκλεϊκό οξύ. Ορισμένα εργαστήρια έχουν καταδείξει τη δυνατότητα κλωνοποίησης του γονιδιώματος του ιού της ηπατίτιδας Α, γεγονός που ανοίγει την προοπτική απόκτησης εμβολίων.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Ανθεκτικότητα στον ιό της ηπατίτιδας Α

Ο ιός είναι σχετικά ανθεκτικός σε υψηλές θερμοκρασίες, οξέα, λιποδιαλύτες (χωρίς λιπίδια), απολυμαντικά και ανέχεται καλά τις χαμηλές θερμοκρασίες. Όλα αυτά συμβάλλουν στη μακροχρόνια διατήρησή του στο εξωτερικό περιβάλλον. Σε θερμοκρασία δωματίου, επιβιώνει για αρκετές εβδομάδες, στους 60 °C χάνει εν μέρει τη μολυσματικότητά του μετά από 4-12 ώρες και εντελώς μετά από αρκετά λεπτά στους 85 °C. Είναι ιδιαίτερα ανθεκτικός στο χλώριο, λόγω του οποίου είναι σε θέση να διεισδύσει στο νερό της βρύσης μέσω των φραγμών των εγκαταστάσεων επεξεργασίας νερού.

Συνοψίζοντας όλα τα δεδομένα, μπορούμε να χαρακτηρίσουμε τον ιό της ηπατίτιδας Α ως εξής:

• ο φυσικός ξενιστής είναι ο άνθρωπος.
• πειραματόζωα - μαρμοζέτες, χιμπατζήδες
• η πηγή μόλυνσης είναι τα κόπρανα.
• η ασθένεια είναι επιδημική και ενδημική·
• οδός μετάδοσης: κοπρανοστοματικό;
• περίοδος επώασης - 14-40 ημέρες.
• μετάβαση σε χρόνια ηπατίτιδα - δεν παρατηρήθηκε.

Οι ανοσολογικές ιδιότητες του HAV είναι οι εξής:

• Πρωτότυπα στελέχη - Ms-1, CR-326, GВG. Όλα είναι ανοσολογικά παρόμοια ή πανομοιότυπα.
• Τα αντισώματα - IgM και IgG, παράγονται σε απόκριση στην εισαγωγή δομικών πρωτεϊνών του ιού και είναι προστατευτικά.
• I. Η προστατευτική δράση της γάμμα σφαιρίνης ανθρώπινου ορού - προλαμβάνει ή εξασθενεί την ασθένεια εάν χορηγηθεί πριν από τη μόλυνση ή κατά την περίοδο επώασης.

Τα φυσικοχημικά χαρακτηριστικά της NAU είναι τα εξής:

• Μορφολογία: σφαιρικό σωματίδιο χωρίς κέλυφος με κυβική συμμετρία, το καψίδιο αποτελείται από 32 καψομερή.
• Διάμετρος - 27-30 nm;
• Πυκνότητα σε CsCl (g/cm3) - 1,38-1,46 (ανοιχτά σωματίδια), 1,33-1,34 (ώριμο ιικό σωματίδιο), 1,29-1,31 (ανώριμα ιικά σωματίδια, κενά σωματίδια).
• Συντελεστής καθίζησης - 156-160 ώριμα ιοσωμάτια.
• Το νουκλεϊκό οξύ είναι ένα μονόκλωνο, γραμμικό RNA.
• Σχετικό μοριακό βάρος - 2,25 × 106-2,8 × 106KD;
• Ο αριθμός των νουκλεοτιδίων είναι 6.500-8.100.

Η σταθερότητα του HAV υπό φυσικές και χημικές επιδράσεις έχει ως εξής:

• Χλωροφόρμιο, αιθέρας - σταθερός;
• Χλώριο, 0,5-1,5 mg/l, 5 °C, 15 λεπτά - μερική απενεργοποίηση.
• Χλωραμίνη, 1 g/l, 20 °C, 15 λεπτά - πλήρης απενεργοποίηση.
• Φορμαλίνη, 1:4000, 35-37 °C, 72 ώρες - πλήρης απενεργοποίηση, 1:350, 20 °C, 60 λεπτά - μερική απενεργοποίηση.

Θερμοκρασία:

• 20-70 °C - σταθερό;
• 56 °C, 30 λεπτά - σταθερό.
• 60 °C, 12 ώρες - μερική απενεργοποίηση.
• 85 °C, 1 λεπτό - πλήρης απενεργοποίηση.
• Αποστείρωση σε αυτόκλειστο, 120 °C. 20 λεπτά - πλήρης απενεργοποίηση.
• Ξηρή θερμότητα, 180 °C, 1 ώρα - πλήρης απενεργοποίηση.
• UFO, 1,1 W, 1 λεπτό - πλήρης απενεργοποίηση.

Τα δεδομένα που παρουσιάζονται δείχνουν ότι, όσον αφορά τις φυσικοχημικές του ιδιότητες, ο ιός της ηπατίτιδας Α είναι πιο κοντά στους εντεροϊούς. Όπως και άλλοι εντεροϊοί, ο ιός HAV είναι ανθεκτικός σε πολλά απολυμαντικά διαλύματα και απενεργοποιείται πλήρως μέσα σε λίγα λεπτά στους 85 °C και σε αυτόκλειστο κλίβανο.

Έχει αποδειχθεί ότι ο ιός της ηπατίτιδας Α μπορεί να αναπαραχθεί σε πρωτογενείς και συνεχείς μονοστρωματικές σειρές κυτταροκαλλιεργειών ανθρώπων και πιθήκων. Ιδιαίτερα ενεργός αναπαραγωγή του ιού της ηπατίτιδας Α σε καλλιέργειες in vitro παρατηρείται όταν χρησιμοποιούνται εκχυλίσματα ήπατος από ασθενείς πιθήκους ως αρχικό υλικό. Πρέπει, ωστόσο, να σημειωθεί ότι σε όλα τα πειράματα αναπαραγωγής του ιού της ηπατίτιδας Α σε καλλιέργειες in vitro, εφιστάται η προσοχή στη μακρά περίοδο επώασης κατά τις πρωτογενείς διελεύσεις (έως 4-10 εβδομάδες), με επακόλουθη αύξηση της συσσώρευσης ιικού γενετικού υλικού, αλλά οι απόλυτες τιμές παραμένουν πολύ ασήμαντες, γεγονός που δίνει αφορμή σε πολλούς ερευνητές να μιλούν για ατελή αναπαραγωγή του ιού της ηπατίτιδας Α σε καλλιέργειες ιστών.

Συνοψίζοντας τα βιβλιογραφικά δεδομένα σχετικά με την αναπαραγωγή του ιού της ηπατίτιδας Α σε εξω-ιστικές καλλιέργειες, μπορεί να ειπωθεί ότι το γεγονός της μακροχρόνιας επιβίωσης του HAV in vitro είναι πέρα από κάθε αμφιβολία. Οι βέλτιστες συνθήκες για ένα σταθερό υψηλό επίπεδο αντιγραφής του ιού δεν έχουν προσδιοριστεί οριστικά και αυτό εμποδίζει τη μελέτη των βιολογικών του ιδιοτήτων, αποκτώντας μια πηγή αντιδραστηρίων για την παραγωγή διαγνωστικών και τον σχεδιασμό εμβολίων.

Ταυτόχρονα, στη βιβλιογραφία μπορούν να βρεθούν πιο αισιόδοξες κρίσεις σχετικά με αυτό το πρόβλημα. Η λύση όλων των ζητημάτων που σχετίζονται με την καλλιέργεια του ιού της ηπατίτιδας Α είναι θέμα του εγγύς μέλλοντος. Κατά τη μελέτη των βέλτιστων συνθηκών για την αναπαραγωγή του HAV στην καλλιέργεια εμβρυϊκών νεφρικών κυττάρων του μακάκου ρέζους, εντοπίστηκαν δύο φάσεις: η φάση παραγωγής του μολυσματικού ιού (έως 6-8 ημέρες στο επίπεδο της 5ης διέλευσης) και η φάση εντατικής συσσώρευσης του ιικού αντιγόνου. Αποδείχθηκε επίσης ότι η πιο σημαντική συσσώρευση του ιικού αντιγόνου συμβαίνει υπό τις συνθήκες της λεγόμενης καλλιέργειας με κύλινδρο (περιστρεφόμενες φιάλες). Αυτή η μέθοδος ανοίγει ευρείες ευκαιρίες για την απόκτηση καλλιεργητικού αντιγόνου σε μεγάλες ποσότητες και, κατά συνέπεια, θα εμφανιστεί το αρχικό υλικό για την παρασκευή διαγνωστικών συστημάτων και την παρασκευή εμβολίων.

Επιδημιολογία της ηπατίτιδας Α

Ο ιός της ηπατίτιδας Α είναι εξαιρετικά παθογόνος για τον άνθρωπο. Σύμφωνα με τον ΠΟΥ (1987), η μόλυνση με ένα μόνο ιό είναι αρκετή για να προκαλέσει την ασθένεια. Ωστόσο, η πρακτική μολυσματική δόση είναι πιθανώς πολύ υψηλότερη. Η μόνη πηγή μόλυνσης είναι ένα μολυσμένο άτομο. Ο ιός απεκκρίνεται σε μεγάλες ποσότητες με τα κόπρανα 12-14 ημέρες πριν από την έναρξη του ίκτερου και κατά τη διάρκεια των 3 εβδομάδων της ικτερικής περιόδου. Δεν έχουν βρεθεί σημαντικές διαφορές στην απέκκριση του παθογόνου σε ασθενείς με ικτερικές, ανικτερικές και ασυμπτωματικές μορφές ηπατίτιδας Α. Η οδός μόλυνσης είναι η κοπρανοστοματική, κυρίως υδατογενής, καθώς και η οικιακή και τροφιμογενής. Η κύρια (πρωτεύουσα) οδός μετάδοσης του ιού είναι η υδατογενής. Η μόλυνση με αερογενή σταγονίδια είναι επίσης πιθανή. Η ευαισθησία του πληθυσμού είναι καθολική. Προσβάλλονται κυρίως παιδιά κάτω των 14 ετών. Η ασθένεια έχει έντονη εποχικότητα φθινοπώρου-χειμώνα.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ]

Συμπτώματα της ηπατίτιδας Α

Η περίοδος επώασης ποικίλλει από 15 έως 50 ημέρες, ανάλογα με τη μολυσματική δόση του ιού, αλλά κατά μέσο όρο είναι 28-30 ημέρες. Μόλις εισέλθει στον οργανισμό, ο ιός της ηπατίτιδας Α πολλαπλασιάζεται στους περιφερειακούς λεμφαδένες, διεισδύει στο αίμα και στη συνέχεια στα ηπατικά κύτταρα και προκαλεί οξεία διάχυτη ηπατίτιδα, η οποία συνοδεύεται από βλάβη στα ηπατοκύτταρα και τα δικτυοενδοθηλιακά στοιχεία του ήπατος και μείωση των λειτουργιών αποτοξίνωσης και φραγμού του. Η βλάβη στα ηπατοκύτταρα δεν οφείλεται στην άμεση δράση του ιού, αλλά ως αποτέλεσμα ανοσοπαθολογικών μηχανισμών. Η πιο τυπική εικόνα της ηπατίτιδας Α είναι η οξεία ικτερική κυκλική μορφή: περίοδος επώασης, πρόδρομη (προικτερική), ικτερική περίοδος και ανάρρωση. Ωστόσο, στις εστίες της λοίμωξης, ανιχνεύεται μεγάλος αριθμός ασθενών με ανικτερικές και ασυμπτωματικές μορφές λοίμωξης, ο αριθμός των οποίων υπερισχύει σημαντικά των ικτερικών ("φαινόμενο παγόβουνου").

Η ανοσία μετά τη μόλυνση είναι ισχυρή και μακράς διαρκείας, που προκαλείται από αντισώματα εξουδετέρωσης ιών και κύτταρα ανοσολογικής μνήμης.

Μικροβιολογική διάγνωση της ηπατίτιδας Α

Η διάγνωση της ηπατίτιδας Α (εκτός από τη μόλυνση ζώων - χιμπατζήδες, μαρμοζέτες, μπαμπουίνοι, τις οποίες δεν διαθέτουμε) βασίζεται σε διάφορες ανοσολογικές μεθόδους: RSC, μέθοδο ανοσοφθορισμού, αιμοσυγκόλληση ανοσοπροσκόλλησης (το σύμπλεγμα ιικού αντιγόνου + αντισώματος παρουσία συμπληρώματος προσροφάται στα ερυθροκύτταρα και προκαλεί την κόλλησή τους). Ωστόσο, οι δυνατότητες χρήσης αυτών των μεθόδων είναι περιορισμένες λόγω της έλλειψης ειδικών ιικών αντιγόνων και η αντίδραση ανοσοφθορισμού απαιτεί βιοψία ήπατος, η οποία είναι ανεπιθύμητη. Η μέθοδος της ανοσοηλεκτρονικής μικροσκοπίας είναι αξιόπιστη και ειδική, αλλά είναι πολύ επίπονη. Επομένως, μέχρι στιγμής η μόνη αποδεκτή ανοσολογική αντίδραση είναι η μέθοδος ανοσοπροσροφητικής ανάλυσης της στερεάς φάσης με τη μορφή IFM ή RIM, ειδικά στην τροποποίηση της "σύλληψης" ανοσοσφαιρινών κατηγορίας Μ. Στη χώρα μας, έχει προταθεί ένα σύστημα δοκιμών για το σκοπό αυτό - "DIAGN-A-HEP". Η αρχή λειτουργίας αυτού του συστήματος δοκιμών έχει ως εξής. Αρχικά, αντισώματα έναντι ανοσοσφαιρινών κατηγορίας Μ (αντιανοσοσφαιρίνες Μ) προσροφώνται στα τοιχώματα φρεατίων πολυστυρενίου και στη συνέχεια προστίθεται ο ορός του ασθενούς που πρόκειται να εξεταστεί. Εάν περιέχει αντισώματα IgM, αυτά θα συνδεθούν με αντισώματα κατηγορίας Μ και στη συνέχεια προστίθεται ένα ειδικό ιικό αντιγόνο (ιός ηπατίτιδας Α), το οποίο λαμβάνεται με καλλιέργεια σε κυτταροκαλλιέργεια. Το σύστημα πλένεται και προστίθενται σε αυτό αντιιικά αντισώματα επισημασμένα με υπεροξειδάση χρένου. Εάν και τα τέσσερα συστατικά του συστήματος αλληλεπιδράσουν, σχηματίζεται ένα "σάντουιτς" τεσσάρων στρωμάτων:

• αντιανοσοσφαιρίνες Μ,
• ανοσοσφαιρίνες Μ (έναντι του ιού της ηπατίτιδας Α - στον ορό του ασθενούς που μελετάται),
• ιικό αντιγόνο,
• ενζυμικά σημασμένα αντισώματα κατά του ιού.

Για την ανίχνευση αυτού του συμπλόκου, προστίθεται στα φρεάτια ένα υπόστρωμα για το ένζυμο. Υπό την επίδραση του ενζύμου, αυτό καταστρέφεται και σχηματίζεται ένα έγχρωμο προϊόν. Η ένταση του χρώματος μπορεί να μετρηθεί ποσοτικά χρησιμοποιώντας φασματοφωτόμετρο ή φωτοχρωματόμετρο.

Το πλεονέκτημα της μεθόδου «σύλληψης» IgM είναι ότι τα αντισώματα αυτής της κατηγορίας ανοσοσφαιρινών εμφανίζονται κατά την πρωτογενή ανοσοαπόκριση και υποδεικνύουν το ενεργό στάδιο της λοίμωξης, εξαφανίζονται μετά την ασθένεια. Τα αντιιικά αντισώματα που ανήκουν στην κατηγορία IgG, αντίθετα, παραμένουν για μεγάλο χρονικό διάστημα μετά την ασθένεια, παρέχοντας επίκτητη ανοσία. Έχει προταθεί μια μέθοδος ανίχνευσης DNA για την ανίχνευση του ιού της ηπατίτιδας Α: χρησιμοποιείται συμπληρωματικό DNA vRNA ως ανιχνευτής.

Θεραπεία της ηπατίτιδας Α

Λόγω του γεγονότος ότι η παραγωγή ιντερφερόνης διαταράσσεται στην ιογενή ηπατίτιδα, η θεραπεία της ηπατίτιδας Α βασίζεται στη χρήση ιντερφερόνης και του επαγωγέα της ενδογενούς σύνθεσής της, της αμιξίνης.

Ειδική πρόληψη της ηπατίτιδας Α

Η προηγουμένως ευρέως χρησιμοποιούμενη οροπροφύλαξη της ηπατίτιδας Α με γάμμα σφαιρίνη δεν δικαιολογούσε τον εαυτό της, επομένως δόθηκε κύρια έμφαση στην προφύλαξη από εμβολιασμό, πραγματοποιείται εμβολιασμός κατά της ηπατίτιδας Α. Για το σκοπό αυτό, αναπτύσσονται και χρησιμοποιούνται ήδη διάφοροι τύποι εμβολίων. Στη Ρωσία, ένα αποτελεσματικό εμβόλιο κατά της ηπατίτιδας Α αποκτήθηκε το 1995 και τώρα χρησιμοποιείται με επιτυχία.