Όλα τα περιεχόμενα του iLive ελέγχονται ιατρικά ή ελέγχονται για να διασφαλιστεί η όσο το δυνατόν ακριβέστερη ακρίβεια.
Έχουμε αυστηρές κατευθυντήριες γραμμές προμήθειας και συνδέουμε μόνο με αξιόπιστους δικτυακούς τόπους πολυμέσων, ακαδημαϊκά ερευνητικά ιδρύματα και, όπου είναι δυνατόν, ιατρικά επισκοπικά μελέτες. Σημειώστε ότι οι αριθμοί στις παρενθέσεις ([1], [2], κλπ.) Είναι σύνδεσμοι με τις οποίες μπορείτε να κάνετε κλικ σε αυτές τις μελέτες.
Εάν πιστεύετε ότι κάποιο από το περιεχόμενό μας είναι ανακριβές, παρωχημένο ή αμφισβητήσιμο, παρακαλώ επιλέξτε το και πατήστε Ctrl + Enter.
Ανάλυση πολυμορφισμού μήκους θραυσμάτων περιορισμού
Ιατρικός εμπειρογνώμονας του άρθρου
Τελευταία επισκόπηση: 05.07.2025
Η ευρεία χρήση διαφόρων περιοριστικών ενδονουκλεασών για την ανάλυση του χρωμοσωμικού DNA έχει αποκαλύψει την τεράστια μεταβλητότητα του ανθρώπινου γονιδιώματος. Ακόμη και μικρές αλλαγές στις κωδικοποιητικές και ρυθμιστικές περιοχές των δομικών γονιδίων μπορούν να οδηγήσουν στη διακοπή της σύνθεσης μιας συγκεκριμένης πρωτεΐνης ή στην απώλεια της λειτουργίας της στο ανθρώπινο σώμα, κάτι που συνήθως επηρεάζει τον φαινότυπο του ασθενούς. Ωστόσο, περίπου το 90% του ανθρώπινου γονιδιώματος αποτελείται από μη κωδικοποιητικές αλληλουχίες, οι οποίες είναι πιο μεταβλητές και περιέχουν πολλές λεγόμενες ουδέτερες μεταλλάξεις ή πολυμορφισμούς και δεν έχουν φαινοτυπική έκφραση. Τέτοιες πολυμορφικές περιοχές (τόποι) χρησιμοποιούνται στη διάγνωση κληρονομικών ασθενειών ως γενετικοί δείκτες. Οι πολυμορφικοί τόποι υπάρχουν σε όλα τα χρωμοσώματα και συνδέονται με μια συγκεκριμένη περιοχή του γονιδίου. Προσδιορίζοντας τον εντοπισμό ενός πολυμορφικού τόπου, είναι δυνατόν να διαπιστωθεί ποιο γονίδιο σχετίζεται με τη μετάλλαξη που προκάλεσε την ασθένεια στον ασθενή.
Για την απομόνωση πολυμορφικών περιοχών DNA, χρησιμοποιούνται βακτηριακά ένζυμα - περιοριστικές ίνες, το προϊόν των οποίων είναι οι θέσεις περιορισμού. Οι αυθόρμητες μεταλλάξεις που εμφανίζονται σε πολυμορφικές θέσεις τις καθιστούν ανθεκτικές ή, αντίθετα, ευαίσθητες στη δράση μιας συγκεκριμένης περιοριστικής ίνας.
Η μεταλλακτική μεταβλητότητα στις θέσεις περιορισμού μπορεί να ανιχνευθεί αλλάζοντας το μήκος των θραυσμάτων περιορισμού του DNA διαχωρίζοντάς τα χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση και επακόλουθο υβριδισμό με ειδικούς ανιχνευτές DNA. Ελλείψει περιορισμού σε μια πολυμορφική θέση, ένα μεγάλο θραύσμα θα ανιχνευθεί σε ηλεκτροφορητικά διαγράμματα, και στην παρουσία του, θα υπάρχει ένα μικρότερο θραύσμα. Η παρουσία ή απουσία μιας θέσης περιορισμού σε πανομοιότυπους τόπους ομόλογων χρωμοσωμάτων επιτρέπει την αρκετά αξιόπιστη επισήμανση του μεταλλαγμένου και του φυσιολογικού γονιδίου και την παρακολούθηση της μετάδοσής του στους απογόνους. Έτσι, κατά τη μελέτη του DNA ασθενών και στα δύο χρωμοσώματα των οποίων υπάρχει μια θέση περιορισμού σε μια πολυμορφική περιοχή, θα ανιχνευθούν σύντομα θραύσματα DNA στο ηλεκτροφορητικό διάγραμμα. Σε ασθενείς ομόζυγους για μια μετάλλαξη που αλλάζει τη θέση πολυμορφικού περιορισμού, θα ανιχνευθούν μεγαλύτερα θραύσματα, και σε ετερόζυγους ασθενείς, μικρά και μεγάλα θραύσματα.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]